Establecimiento de un sistema de puntaje semi-automático para ensayos histoquímicos e inmunohistoquímicos con el fin de evaluar diferenciación condrogénica in vitro (2012)
Durante o desenvolvimento embrionário os membros emergem a partir da condensação de células mesenquimais e sua diferenciação em condrócitos em um processo chamado condrogênese. Estes condrócitos sintetizam glicosaminoglicanos, desempenhando um papel importante neste processo. Existe um sistema de condrogénese in vitro utilizando células mesenquimatosas, geralmente avaliado por histoquímica. Objetivo. Estabelecer um sistema de pontuação semi-automático para ensaios histoquímicos e imuno-histoquímicos. Materiais e métodos. Na condrogênese as células foram cultivadas com meio indutor em agregados, durante três semanas. Os glicosaminoglicanos totais foram determinados pelo azul de dimetileno. Para a análise histológica os agregados foram corados com Azul Alciano e imuno-histoquímica para detecção de agrecan. A pontuação semi-automática foi obtida utilizando o programa ImageJ. Resultados. As células mesenquimais cultivadas em meio de diferenciação condrogênica tiveram uma concentração de proteína comparável durante as três semanas de cultura, o que sugere uma celularidade similar. A concentração de glicosaminoglicanos foi maior para os agregados cultivados em meio condrogênico. A mesma tendência foi observada para a coloração com Azul Alciano segundo as pontuações do observador cego e a análise com ImageJ. Finalmente, os resultados de imuno-histoquímica de pontuações dados pelo observador e aqueles dados pela análise ImageJ revelaram uma tendência decrescente ao longo do tempo para os agregados em meio condrogênico. Conclusão. Nós realizamos um sistema funcional para gerar pontuação semi-automática para diferenciação condrogênica. Nós corroboramos esses resultados por análise bioquímica com resultados comparáveis. Segundo nosso conhecimento, este é o primeiro estudo a avaliar esta metodologia, que pode ser útil para outras aplicações no campo biológico ou médico.Palavras-chave: células mesenquimais, condrogênese in vitro, glicosaminoglicanos, ImageJ.