Proteínas de choque térmico y vesículas de membrana como posibles inmunomoduladores producidos durante la infección por rotavirus de células epiteliales intestinales (2010)
El rotavirus (RV) es el principal agente viral causante de gastroenteritis severa en niños. En el momento existen 2 vacunas licenciadas que han sido adoptadas dentro de los programas de inmunización de muchos países, sin embargo, aún se desconocen muchos aspectos de los mecanismos inmunológicos que median la respuesta frente al virus. Uno de los hallazgos en este aspecto es el hecho que las frecuencias de linfocitos T (LT) circulantes específicos contra RV presentes en niños y adultos infectados son bajas comparadas con otras infecciones, y se ha postulado que esto podría explicar en parte la baja protección generada después de una primo-infección. El RV es un patógeno intestinal, es por esto que el ambiente altamente tolerogénico de la mucosa intestinal podría ser en parte responsable de modular la respuesta inmune frente a este virus. Para dilucidar los mecanismos que median esta respuesta decidimos estudiar algunos inmunomoduladores producidos durante la infección por RV de células epiteliales intestinales (CEI). Se usó como modelo de CEI a la línea celular de origen colónico Caco-2, a la cual se le han descrito varias propiedades asociadas con células epiteliales de tipo enterocito. Usando células Caco-2 polarizadas espontáneamente en cultivo encontramos que con la infección por RV se liberan un conjunto de mediadores considerados anti-inflamatorios (no Th1), entre los que se encuentra la citocina regulatoria TGF-ß1| pero también se liberan las proteínas de choque térmico (PCT) HSC70 y HSP70. Aunque tanto estas PCT como el TGF- ß1 se liberan principalmente de forma soluble, una parte de estas moléculas podrían liberarse de una forma asociada a vesículas de membrana (VM). Estas VM fueron concentradas por ultracentrifugación y caracterizadas de acuerdo a las metodologías descritas para estudiar exosomas, como son la presencia (CD63, actividad acetilcolinesterasa, lactaderina) o ausencia (calnexina, histona H2B) de algunos marcadores, sus características morfológicas por microscopia electrónica y el análisis de algunos de los marcadores estudiados a través de la flotación sobre un gradiente lineal de sacarosa. De esta forma se encontró que durante la infección por RV de las CEI se incrementa la liberación de una población heterogénea de VM, en la cual se encontraron algunas con características típicas de exosomas, pero también otras que podrían considerarse de cuerpos apoptóticos. A las VM se les han propuesto diferentes propiedades inmunomoduladoras como son la capacidad de participar en mecanismos de transferencia antigénica hacia células presentadoras de antígenos favoreciendo finalmente respuestas inmunes específicas, o por otro lado, la de poder inhibir a los LT cuando interactúan directamente sobre ellos. Aunque no evaluamos la primera de ellas, pensamos que es posible que estas VM tengan la potencialidad de mediar esta función ya que dentro de la caracterización de estas VM se encontró que una pequeña parte de antígeno de RV se asocia a ellas. Por otro lado, se evaluó la función inhibidora de LT a través de un ensayo sobre LT purificados y activados con la enterotoxina B de Sthaphylococcus spp (SEB) en el cual se estudió el efecto que pudieran tener las VM sobre la viabilidad y sobre la proliferación de estas células inmunes. Encontramos que los dos tipos de vesículas (exosomas y del tipo cuerpos apoptóticos), derivados de las células infectadas, afectan en menor o mayor grado la función de LT estimulados policlonalmente con SEB. Estos efectos son en parte mediados por la citocina TGF- ß1, la cual también se encontró asociada a esta fracción heterogénea de VM. Por lo tanto, proponemos que este podría ser un mecanismo inmunomodulador mediado por el RV durante su infección a CEI, que podría explicar en parte la baja respuesta de LT observada durante la infección por RV.