Evaluación del papel de PD-L1 en la proliferación en una línea celular de melanoma murino

El melanoma es el tipo de cáncer de piel más agresivo que existe y es una de las principales causas de muerte por cáncer a nivel mundial. Se ha demostrado que este tipo de cáncer tiene un alto infiltrado inmune y es por esto que se han desarrollado diferentes estrategias de inmunoterapia que tienen...

Full description

Autores:
Arias Rodríguez, Nicolás Esteban
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2020
Institución:
Pontificia Universidad Javeriana
Repositorio:
Repositorio Universidad Javeriana
Idioma:
spa
OAI Identifier:
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Acceso en línea:
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Palabra clave:
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Melanoma
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Crispr
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Proliferation
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Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas
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Proliferación - Bogotá (Colombia)
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description El melanoma es el tipo de cáncer de piel más agresivo que existe y es una de las principales causas de muerte por cáncer a nivel mundial. Se ha demostrado que este tipo de cáncer tiene un alto infiltrado inmune y es por esto que se han desarrollado diferentes estrategias de inmunoterapia que tienen como objetivo la activacion de la respuesta inmune antitumoral. Entre las moléculas utilizadas para dichas estrategias se encuentran los puntos de chequeo inmune, como la proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) y su ligando PD- L1, encargados de regular la respuesta inmune en especial la actividad de los linfocitos T. Además de la expresión en células del sistema inmune, se ha descrito la expresión de PD- L1 también en células tumorales. En melanoma, se ha evidenciado una alta expresión de PD-L1 y se ha asociado con un peor pronóstico de la enfermedad. Además, la expresión de PD-L1 en células tumorales se asocia con la generación de señales de supervivencia y proliferación que pueden promover la progresión del cáncer. Teniendo en cuenta la importancia que puede tener esta proteína en procesos tumorales, especialmente en la proliferación, el objetivo de este proyecto fue evaluar el efecto de PD-L1 en la proliferación de una línea celular de melanoma murino. Para llevar a cabo esta investigación se utilizó la línea celular B16-F10, y los clones knock-out de PD-L1 generados por el grupo de Inmunobiología y Biología Celular de la Pontificia Universidad Javeriana haciendo uso del sistema CRISPR/Cas9. Adicionalmente, como control se utilizó la línea celular B16-F10 Scramble, generada utilizando el mismo sistema. En estas líneas se determinó la expresión de PD-L1 a nivel de superficie e intracelular por citometría de flujo y se confirmaron los resultados de la expresión de PD-L1 por Western Blot. Posteriormente, se evaluó la proliferación de estas células a 24, 48 y 72 horas haciendo conteo con azul de tripano en cámara de Neubauer. Se logró confirmar la efectividad del sistema CRISPR/Cas9 y la ausencia de PD-L1 en los clones generados, asimismo se observó una tendencia a la disminución de la proliferación a las 48 y 72 horas de los clones generados en comparación con las células control. Esta tendencia sugiere que PD-L1 podría estar regulando procesos de proliferación en la célula tumoral, sin embargo, se requiere de un estudio más profundo para confirmar estos resultados.
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De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, "Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores", los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Prieto Sarmiento, Karol MildredLasso Apráez, Paola VerónicaArias Rodríguez, Nicolás EstebanIglesias Jiménez, José AlfredoColombiaCundinamarca (Colombia)Bogotá, D.C. (Bogotá, Colombia)Bogotá (Colombia)2020-07-08T15:13:36Z2020-07-08T15:13:36Z2020-07-01http://hdl.handle.net/10554/50294El melanoma es el tipo de cáncer de piel más agresivo que existe y es una de las principales causas de muerte por cáncer a nivel mundial. Se ha demostrado que este tipo de cáncer tiene un alto infiltrado inmune y es por esto que se han desarrollado diferentes estrategias de inmunoterapia que tienen como objetivo la activacion de la respuesta inmune antitumoral. Entre las moléculas utilizadas para dichas estrategias se encuentran los puntos de chequeo inmune, como la proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) y su ligando PD- L1, encargados de regular la respuesta inmune en especial la actividad de los linfocitos T. Además de la expresión en células del sistema inmune, se ha descrito la expresión de PD- L1 también en células tumorales. En melanoma, se ha evidenciado una alta expresión de PD-L1 y se ha asociado con un peor pronóstico de la enfermedad. Además, la expresión de PD-L1 en células tumorales se asocia con la generación de señales de supervivencia y proliferación que pueden promover la progresión del cáncer. Teniendo en cuenta la importancia que puede tener esta proteína en procesos tumorales, especialmente en la proliferación, el objetivo de este proyecto fue evaluar el efecto de PD-L1 en la proliferación de una línea celular de melanoma murino. Para llevar a cabo esta investigación se utilizó la línea celular B16-F10, y los clones knock-out de PD-L1 generados por el grupo de Inmunobiología y Biología Celular de la Pontificia Universidad Javeriana haciendo uso del sistema CRISPR/Cas9. Adicionalmente, como control se utilizó la línea celular B16-F10 Scramble, generada utilizando el mismo sistema. En estas líneas se determinó la expresión de PD-L1 a nivel de superficie e intracelular por citometría de flujo y se confirmaron los resultados de la expresión de PD-L1 por Western Blot. Posteriormente, se evaluó la proliferación de estas células a 24, 48 y 72 horas haciendo conteo con azul de tripano en cámara de Neubauer. Se logró confirmar la efectividad del sistema CRISPR/Cas9 y la ausencia de PD-L1 en los clones generados, asimismo se observó una tendencia a la disminución de la proliferación a las 48 y 72 horas de los clones generados en comparación con las células control. Esta tendencia sugiere que PD-L1 podría estar regulando procesos de proliferación en la célula tumoral, sin embargo, se requiere de un estudio más profundo para confirmar estos resultados.Melanoma is the most aggressive type of skin cancer that exists and is one of the leading causes of cancer death worldwide. This type of cancer has been shown to have a high immune infiltrate and this is why different immunotherapy strategies have been developed that aim to activate the anti-tumor immune response. Among the molecules used for these strategies are immune checkpoints, such as programmed cell death protein 1 (PD-1) and its ligand PD-L1, responsible for regulating the immune response, especially the activity of T lymphocytes. In addition to expression in cells of the immune system, expression of PD-L1 has also been described in tumor cells. In melanoma, a high expression of PD-L1 has been evidenced and has been associated with a worse prognosis of the disease. Furthermore, the expression of PD-L1 in tumor cells is associated with the generation survival signs and proliferation that can promote the progression of cancer. Taking into account the importance that this protein may have in tumor processes, especially in proliferation, the objective of this project was to evaluate the effect of PD-L1 on the proliferation of a murine melanoma cell line. The B16-F10 cell line and the PD-L1 knockout clones generated by the Immunobiology and Cell Biology group at Pontificia Universidad Javeriana using the CRISPR/Cas9 system were used to carry out this research. Additionally, the B16-F10 Scramble cell line, generated using the same system, was used as a control. In these lines PD-L1 expression was determined at the surface and intracellular level by flow cytometry and the results of PD-L1 expression by Western Blot were confirmed. Subsequently, the proliferation of these cells was evaluated at 24, 48 and 72 hours by counting with trypan blue in a Neubauer chamber. It was possible to confirm the effectiveness of the CRISPR / Cas9 system and the absence of PD-L1 in the generated clones, also a tendency to decrease proliferation was observed at 48 and 72 hours of the generated clones compared to control cells. This trend suggests that PD-L1 may be regulating processes of proliferation in the tumor cell, however, further studies are required to confirm these results.Bacteriólogo (a)PregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaBacteriologíaFacultad de CienciasPd-l1MelanomaProliferaciónCrisprCrispr/cas9Pd-l1MelanomaProliferationCrisprCrispr/cas9Bacteriología - Tesis y disertaciones académicasMelanomaProliferación - Bogotá (Colombia)Evaluación del papel de PD-L1 en la proliferación en una línea celular de melanoma murinoEvaluation of the role of PD-L1 in proliferation in a murine melanoma cell lineTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALPD-L1 en melanoma.pdfPD-L1 en melanoma.pdfDocumentoapplication/pdf1115663http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/50294/1/PD-L1%20en%20melanoma.pdf6348b741f44ec7382ebbf745c12ea0cbMD51open accessNICOLÁS ESTEBAN ARIAS RODRÍGUEZ.docx.pdfNICOLÁS ESTEBAN ARIAS RODRÍGUEZ.docx.pdfCarta de aprobación Director(es)application/pdf767301http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/50294/2/NICOLA%cc%81S%20ESTEBAN%20ARIAS%20RODRI%cc%81GUEZ.docx.pdfc6ac6fd7085bf5095c6523c4119a352dMD52open accessCarta_de_autorizacion.pdfCarta_de_autorizacion.pdfLicencia de usoapplication/pdf173984http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/50294/4/Carta_de_autorizacion.pdf22741048ebe05b47b02bf11372d012bfMD54metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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