Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris
Las lacasas tienen gran importancia a nivel industrial debido a su alto potencial oxidativo e inespecificidad de sustrato, lo que permite su uso en procesos como el tratamiento de aguas residuales. El objetivo de este trabajo fue diseñar un medio económico para la producción de la lacasa rPOXA 1B de...
- Autores:
-
Alvarado Ramírez, María Fernanda
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/39159
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/39159
- Palabra clave:
- Lacasas
Pichia pastoris
Promotor GAP
Actividad lacasa
Costos
Laccases
Pichia pastoris
GAP promoter
Laccase activity
Costs
Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas
Aguas residuales - Purificación - Tratamiento biológico
- Rights
- openAccess
- License
- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
| id |
JAVERIANA2_a64c46b30cfba20784cf9c697a834143 |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:repository.javeriana.edu.co:10554/39159 |
| network_acronym_str |
JAVERIANA2 |
| network_name_str |
Repositorio Universidad Javeriana |
| repository_id_str |
|
| dc.title.spa.fl_str_mv |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| title |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| spellingShingle |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris Lacasas Pichia pastoris Promotor GAP Actividad lacasa Costos Laccases Pichia pastoris GAP promoter Laccase activity Costs Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas Aguas residuales - Purificación - Tratamiento biológico |
| title_short |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| title_full |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| title_fullStr |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| title_full_unstemmed |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| title_sort |
Diseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris |
| dc.creator.fl_str_mv |
Alvarado Ramírez, María Fernanda |
| dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv |
Gutiérrez Rojas, Ivonne Del Socorro Poutou Piñales, Raúl Alberto |
| dc.contributor.author.none.fl_str_mv |
Alvarado Ramírez, María Fernanda |
| dc.contributor.evaluator.none.fl_str_mv |
Matiz Villamil, Adriana |
| dc.subject.spa.fl_str_mv |
Lacasas Pichia pastoris Promotor GAP Actividad lacasa Costos |
| topic |
Lacasas Pichia pastoris Promotor GAP Actividad lacasa Costos Laccases Pichia pastoris GAP promoter Laccase activity Costs Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas Aguas residuales - Purificación - Tratamiento biológico |
| dc.subject.keyword.spa.fl_str_mv |
Laccases Pichia pastoris GAP promoter Laccase activity Costs |
| dc.subject.armarc.spa.fl_str_mv |
Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas Aguas residuales - Purificación - Tratamiento biológico |
| description |
Las lacasas tienen gran importancia a nivel industrial debido a su alto potencial oxidativo e inespecificidad de sustrato, lo que permite su uso en procesos como el tratamiento de aguas residuales. El objetivo de este trabajo fue diseñar un medio económico para la producción de la lacasa rPOXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris a escala de laboratorio. Se utilizaron dos Diseños Centrales Compuestos (DCC) con materias primas económicas con el fin disminuir los costos y producir enzima recombinante. La interacción de las variables mostró que la actividad lacasa máxima fue obtenida a las 168 horas (8771.605 ± 155.12 UL-1) cuando la concentración de glucosa USP, proteína de soya, extracto de malta, (NH4)2SO4, cloranfenicol y CuSO4 fue de 20, 40, 11.74, 4.72, 0.1 gL-1 y 1mM respectivamente. La concentración obtenida para las variables (medio de cultivo de menor costo mejorado) fueron más altas en comparación a las previamente establecidas en el medio mejorado. La aplicación de la Metodología de Superficie Respuesta (MSR) resultó en un aumento del 69.94% de la actividad lacasa en comparación con el medio sin optimizar y 11.73% superior a la obtenida anteriormente en biorreactor de 10 L (VET 60%), además, se obtuvo una reducción de costos de 90.28% y una disminución del valor de la unidad enzimática por litro de medio (UL-1) de 91.43%, en comparación al medio previamente mejorado. |
| publishDate |
2018 |
| dc.date.accessioned.none.fl_str_mv |
2018-12-10T14:34:00Z 2020-04-15T20:20:01Z |
| dc.date.available.none.fl_str_mv |
2018-12-10T14:34:00Z 2020-04-15T20:20:01Z |
| dc.date.created.none.fl_str_mv |
2018-11-29 |
| dc.type.local.spa.fl_str_mv |
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado |
| dc.type.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.type.driver.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| format |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.identifier.uri.none.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/10554/39159 |
| dc.identifier.instname.spa.fl_str_mv |
instname:Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.identifier.reponame.spa.fl_str_mv |
reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.identifier.repourl.spa.fl_str_mv |
repourl:https://repository.javeriana.edu.co |
| url |
http://hdl.handle.net/10554/39159 |
| identifier_str_mv |
instname:Pontificia Universidad Javeriana reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana repourl:https://repository.javeriana.edu.co |
| dc.language.iso.spa.fl_str_mv |
spa |
| language |
spa |
| dc.rights.licence.*.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional |
| dc.rights.uri.*.fl_str_mv |
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
| dc.rights.accessrights.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
| dc.rights.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| rights_invalid_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| eu_rights_str_mv |
openAccess |
| dc.format.spa.fl_str_mv |
PDF |
| dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv |
application/pdf |
| dc.publisher.spa.fl_str_mv |
Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.publisher.program.spa.fl_str_mv |
Microbiología Industrial |
| dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv |
Facultad de Ciencias |
| institution |
Pontificia Universidad Javeriana |
| bitstream.url.fl_str_mv |
http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/1/Trabajo%20de%20grado%20Final.pdf http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/2/ANEXO%201.pdf http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/3/FIRMAS%20001.pdf http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/4/license.txt http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/5/Trabajo%20de%20grado%20Final.pdf.jpg http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/6/ANEXO%201.pdf.jpg http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/7/FIRMAS%20001.pdf.jpg |
| bitstream.checksum.fl_str_mv |
96c13e751ac04637c57ae8424a1c7de5 7261e552cb1305cf467e88aeef98aef6 63972e6f2d39be4e2d828850df18dd15 2070d280cc89439d983d9eee1b17df53 c3ebfb441479e126b2dd3b9b8bf17608 4cbf28eadb7936fc9af037eaa573ba21 927b1d45368c541579a7a5a70b9d92e3 |
| bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 |
| repository.name.fl_str_mv |
Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana |
| repository.mail.fl_str_mv |
repositorio@javeriana.edu.co |
| _version_ |
1808388960007749632 |
| spelling |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Gutiérrez Rojas, Ivonne Del SocorroPoutou Piñales, Raúl AlbertoAlvarado Ramírez, María FernandaMatiz Villamil, Adriana2018-12-10T14:34:00Z2020-04-15T20:20:01Z2018-12-10T14:34:00Z2020-04-15T20:20:01Z2018-11-29http://hdl.handle.net/10554/39159instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coLas lacasas tienen gran importancia a nivel industrial debido a su alto potencial oxidativo e inespecificidad de sustrato, lo que permite su uso en procesos como el tratamiento de aguas residuales. El objetivo de este trabajo fue diseñar un medio económico para la producción de la lacasa rPOXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris a escala de laboratorio. Se utilizaron dos Diseños Centrales Compuestos (DCC) con materias primas económicas con el fin disminuir los costos y producir enzima recombinante. La interacción de las variables mostró que la actividad lacasa máxima fue obtenida a las 168 horas (8771.605 ± 155.12 UL-1) cuando la concentración de glucosa USP, proteína de soya, extracto de malta, (NH4)2SO4, cloranfenicol y CuSO4 fue de 20, 40, 11.74, 4.72, 0.1 gL-1 y 1mM respectivamente. La concentración obtenida para las variables (medio de cultivo de menor costo mejorado) fueron más altas en comparación a las previamente establecidas en el medio mejorado. La aplicación de la Metodología de Superficie Respuesta (MSR) resultó en un aumento del 69.94% de la actividad lacasa en comparación con el medio sin optimizar y 11.73% superior a la obtenida anteriormente en biorreactor de 10 L (VET 60%), además, se obtuvo una reducción de costos de 90.28% y una disminución del valor de la unidad enzimática por litro de medio (UL-1) de 91.43%, en comparación al medio previamente mejorado.Vicerrectoría de Investigaciones de la Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia.The laccases have great importance at the industrial level due to their high oxidative potential and non-specificity substrate, which allows their use in processes such as wastewater treatment. The objective of this work was to create an economic growth medium for the production of the rPOXA 1B laccase of Pleurotus ostreatus in Pichia pastoris at laboratory scale. Two Compound Central Designs (CCD) were used with economical raw materials in order to reduce costs and produce recombinant enzymes. The interaction of the variables showed that the maximum activity was obtained at 168 hours (8771.605 ± 155.12 UL-1) when the glucose USP, soybean protein, malt extract, (NH4) 2SO4, chloramphenicol and CuSO4 concentration was 20, 40, 11.74 , 4.72, 0.1 gL-1 and 1 mM respectively. The obtained concentration for the variables (culture medium of lower cost improved) were higher in comparison to those previously established in the improved medium. The application of the Surface Response Methodology (MSR) was obtained in an increase of 69.94% of the laccase activity in the comparison with the non-optimized medium and 11.73% higher than that obtained in a 10 L bioreactor (VET 60%), in addition, a cost reduction of 90.28% and a decrease in the value of the enzymatic unit per liter of medium (UL-1) of 91.43% was obtained, compared to the previously improved medium.Microbiólogo (a) IndustrialPregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaMicrobiología IndustrialFacultad de CienciasLacasasPichia pastorisPromotor GAPActividad lacasaCostosLaccasesPichia pastorisGAP promoterLaccase activityCostsMicrobiología industrial - Tesis y disertaciones académicasAguas residuales - Purificación - Tratamiento biológicoDiseño de un medio de cultivo de menor costo para la producción a escala de laboratorio de la lacasa recombiannte POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastorisTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALTrabajo de grado Final.pdfTrabajo de gradoapplication/pdf1562028http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/1/Trabajo%20de%20grado%20Final.pdf96c13e751ac04637c57ae8424a1c7de5MD51open accessANEXO 1.pdfCartasapplication/pdf1379396http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/2/ANEXO%201.pdf7261e552cb1305cf467e88aeef98aef6MD52metadata only accessFIRMAS 001.pdfCartas de aprobaciónapplication/pdf708478http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/3/FIRMAS%20001.pdf63972e6f2d39be4e2d828850df18dd15MD53metadata only accessLICENSElicense.txttext/plain2603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/4/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD54open accessTHUMBNAILTrabajo de grado Final.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3165http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/5/Trabajo%20de%20grado%20Final.pdf.jpgc3ebfb441479e126b2dd3b9b8bf17608MD55open accessANEXO 1.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5292http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/6/ANEXO%201.pdf.jpg4cbf28eadb7936fc9af037eaa573ba21MD56open accessFIRMAS 001.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5387http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39159/7/FIRMAS%20001.pdf.jpg927b1d45368c541579a7a5a70b9d92e3MD57open access10554/39159oai:repository.javeriana.edu.co:10554/391592022-05-02 16:53:02.005Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepositorio@javeriana.edu.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 |