Producción de la enzima n-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa humana en pichia pastoris
La enfermedad de Morquio A o mucopolisacaridosis IV A (MPS IV A) es una enfermedad autosómica recesiva de depósito lisosomal, causada por un defecto en el gen ubicado en 16q24.3, afectando la expresión de la enzima N-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa (GALNS) y favoreciendo la progresiva acumul...
- Autores:
-
Moreno Medina, Jefferson
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2012
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/11811
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/11811
- Palabra clave:
- Proteínas recombinantes
Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas
- Rights
- openAccess
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- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
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La enfermedad de Morquio A o mucopolisacaridosis IV A (MPS IV A) es una enfermedad autosómica recesiva de depósito lisosomal, causada por un defecto en el gen ubicado en 16q24.3, afectando la expresión de la enzima N-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa (GALNS) y favoreciendo la progresiva acumulación de los glucosaminoglicanos (GAGs), queratán sulfato QS y condroitín-6-sulfato C6S, lo que genera múltiples daños que incluyen el sistema musculo-esquelético, cardio-respiratorio, entre otros. Debido a que presenta diferentes patologías no cuenta con un tratamiento específico, por eso el avance de la terapia de reemplazo enzimático para esta enfermedad es de gran importancia. En este trabajo se evaluó la producción de la enzima GALNS recombinante en Pichia pastoris de la cepa GS115 a escala de 10, 100 y 1700 mL. Además, se evaluaron concentraciones de 0,5, 1,5 y 2,5% de sustrato inductor a escala de 100 mL. La máxima actividad enzimática en las diferentes escalas fue observada alrededor de las 95 h de fermentación, con una producción a 1,7 L de cultivo de 0,106 U mg-1 GALNS, un rendimiento de 0,09 U mg-1 GALNS g-1y una actividad específica de 0,23 Umg-1 proteína total. Mediante SDS-PAGE se observaron 2 bandas alrededor de 50 y 31 kDa. El Western Blot identificó la presencia del monómero de 50 kDa aproximadamente y otra de más de 100 KDa que sugiere la presencia del dímero, evaluado a las horas de la máxima expresión GALNS (86 y 96 h) en los cultivos de biorreactor. Estos resultados muestran el potencial de producción de la enzima recombinante GALNS en P. pastoris transformada con pPIC9-GALNS para su aplicación de la terapia de reemplazo enzimático para la MPS IV A. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Alméciga-Díaz, Carlos JavierRodríguez López, Edwin AlexanderMoreno Medina, Jefferson2015-01-17T21:22:17Z2016-03-29T14:24:22Z2020-04-15T20:11:55Z2015-01-17T21:22:17Z2016-03-29T14:24:22Z2020-04-15T20:11:55Z2012http://hdl.handle.net/10554/11811instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coLa enfermedad de Morquio A o mucopolisacaridosis IV A (MPS IV A) es una enfermedad autosómica recesiva de depósito lisosomal, causada por un defecto en el gen ubicado en 16q24.3, afectando la expresión de la enzima N-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa (GALNS) y favoreciendo la progresiva acumulación de los glucosaminoglicanos (GAGs), queratán sulfato QS y condroitín-6-sulfato C6S, lo que genera múltiples daños que incluyen el sistema musculo-esquelético, cardio-respiratorio, entre otros. Debido a que presenta diferentes patologías no cuenta con un tratamiento específico, por eso el avance de la terapia de reemplazo enzimático para esta enfermedad es de gran importancia. En este trabajo se evaluó la producción de la enzima GALNS recombinante en Pichia pastoris de la cepa GS115 a escala de 10, 100 y 1700 mL. Además, se evaluaron concentraciones de 0,5, 1,5 y 2,5% de sustrato inductor a escala de 100 mL. La máxima actividad enzimática en las diferentes escalas fue observada alrededor de las 95 h de fermentación, con una producción a 1,7 L de cultivo de 0,106 U mg-1 GALNS, un rendimiento de 0,09 U mg-1 GALNS g-1y una actividad específica de 0,23 Umg-1 proteína total. Mediante SDS-PAGE se observaron 2 bandas alrededor de 50 y 31 kDa. El Western Blot identificó la presencia del monómero de 50 kDa aproximadamente y otra de más de 100 KDa que sugiere la presencia del dímero, evaluado a las horas de la máxima expresión GALNS (86 y 96 h) en los cultivos de biorreactor. Estos resultados muestran el potencial de producción de la enzima recombinante GALNS en P. pastoris transformada con pPIC9-GALNS para su aplicación de la terapia de reemplazo enzimático para la MPS IV A.Microbiólogo (a) IndustrialPregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaMicrobiología IndustrialFacultad de CienciasProducción de la enzima n-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa humana en pichia pastorisTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisProteínas recombinantesMicrobiología industrial - Tesis y disertaciones académicasORIGINALMorenoMedinaJefferson2012.pdfapplication/pdf1143307http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/11811/1/MorenoMedinaJefferson2012.pdf71756e4cca3ea497b6bdd38772dc19deMD51open accessTHUMBNAILMorenoMedinaJefferson2012.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2908http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/11811/2/MorenoMedinaJefferson2012.pdf.jpg90f87745c51aba2be085dee6d3256b9bMD52open access10554/11811oai:repository.javeriana.edu.co:10554/118112022-05-03 12:12:52.382Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepositorio@javeriana.edu.co |