Establecimiento de Protocolos Operativos Estándar (POE) para la identificación de hongos filamentosos patógenos para el humano relacionados con los filos Ascomycota y Mucoromycota por la tecnología MALDI-TOF /MS
El diagnóstico rápido de las infecciones fúngicas por hongos filamentosos es fundamental para reducir la mortalidad y las complicaciones y dirigir de manera oportuna la terapia antifúngica. La espectrometría de masas conocida como MALDI-TOF, está emergiendo como un método de identificación en microb...
- Autores:
-
Prieto Nuñez, Natalia María
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
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- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/39204
- Palabra clave:
- Hongos filamentosos
Pacientes inmunocomprometidos
Identificación
Protocolo
Extracción de proteínas
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Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas
Hongos filamentosos
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El diagnóstico rápido de las infecciones fúngicas por hongos filamentosos es fundamental para reducir la mortalidad y las complicaciones y dirigir de manera oportuna la terapia antifúngica. La espectrometría de masas conocida como MALDI-TOF, está emergiendo como un método de identificación en microbiología clínica. Sin embargo, la detección de hongos filamentosos por esta técnica aún está en desarrollo y sigue siendo un reto debido a la falta de un protocolo universal de extracción de proteínas. Por tal razón este proyecto tuvo como objetivo estandarizar el protocolo de extracción de proteínas para la identificación de hongos filamentosos patógenos para humanos relacionados con los filos Ascomycota y Mucoromycota por la tecnología MALDI-TOF / MS de Biotyper® - Bruker. Se emplearon dos protocolos para la extracción de proteínas que parten de una primera fase recomendada por el fabricante que inicia por la formación de biomasas en medio líquido Sabouraud. El primer protocolo se llevó a cabo mediante el uso de ácido fórmico al 80% y acetonitrilo al 100% y en el segundo se utilizaron perlas de vidrio, ácido fórmico al 80%, acetonitrilo al 100% y congelación. Con respecto a los resultados de los 22 aislamientos analizados, el 86.37% pudo identificarse con una puntuación superior a 1.7. Los restantes (13,63%) fueron aislamientos complejos de identificar con puntuaciones que oscilaban entre 0 a 1,3. En conclusión en el presente estudio se desarrolló el protocolo 1 el cual fue el método relevante y reproducible para identificar varios hongos filamentosos que pertenecen al filo Ascomycota y Mucoromycota. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Parra Giraldo, Claudia MarcelaPrieto Nuñez, Natalia MaríaSuárez Guevara, Marcela Isabel2018-12-11T13:34:14Z2020-04-15T15:49:31Z2018-12-11T13:34:14Z2020-04-15T15:49:31Z2018-12-10http://hdl.handle.net/10554/39204instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coEl diagnóstico rápido de las infecciones fúngicas por hongos filamentosos es fundamental para reducir la mortalidad y las complicaciones y dirigir de manera oportuna la terapia antifúngica. La espectrometría de masas conocida como MALDI-TOF, está emergiendo como un método de identificación en microbiología clínica. Sin embargo, la detección de hongos filamentosos por esta técnica aún está en desarrollo y sigue siendo un reto debido a la falta de un protocolo universal de extracción de proteínas. Por tal razón este proyecto tuvo como objetivo estandarizar el protocolo de extracción de proteínas para la identificación de hongos filamentosos patógenos para humanos relacionados con los filos Ascomycota y Mucoromycota por la tecnología MALDI-TOF / MS de Biotyper® - Bruker. Se emplearon dos protocolos para la extracción de proteínas que parten de una primera fase recomendada por el fabricante que inicia por la formación de biomasas en medio líquido Sabouraud. El primer protocolo se llevó a cabo mediante el uso de ácido fórmico al 80% y acetonitrilo al 100% y en el segundo se utilizaron perlas de vidrio, ácido fórmico al 80%, acetonitrilo al 100% y congelación. Con respecto a los resultados de los 22 aislamientos analizados, el 86.37% pudo identificarse con una puntuación superior a 1.7. Los restantes (13,63%) fueron aislamientos complejos de identificar con puntuaciones que oscilaban entre 0 a 1,3. En conclusión en el presente estudio se desarrolló el protocolo 1 el cual fue el método relevante y reproducible para identificar varios hongos filamentosos que pertenecen al filo Ascomycota y Mucoromycota.Laboratorio de micosis humanas y proteòmicaRapid diagnosis of fungal infections by filamentous fungi is essential to reduce mortality and complications. Thereby, an early diagnosis could allow to manage, as early as possible infections with the most appropriate therapy. A mass spectrometry technique known as MALDI-TOF, is emerging as a reliable identification method in clinical microbiology. Unfortunately, the detection of filamentous fungi by this technique is still under development and remains a challenge due to the lack of a universal protein extraction protocol. The objective was Standardize the protein extraction protocol for the identification of human pathogenic filamentous fungi related to Ascomycota and Mucoromycota by the MALDI-TOF / MS technology of Biotyper® - Bruker. Two protocols were used for the extraction of proteins, both beginning with an initial phase recommended by the manufacturer, namely, the formation of biomass in a Sabouraud liquid medium. The first protocol was carried out using 80% formic acid and 100% acetonitrile. On the other hand, the second protocol was performed with glass beads, 80% formic acid and 100% acetonitrile followed up by freezing procedure. With respect to the results Of the 22 isolates analyzed, 86.37% could be identified with a score higher than 1.7 for identification. The remaining (13.63%) were isolates troublesome to identify accordingly to a recording scores ranged from 0 to 1.3. In conclusion In this study, we developed a relevant and reproductible method (Protocol 1), to identify several filamentous fungi belonging to Ascomycota and Mucoromycota.Bacteriólogo (a)PregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaBacteriologíaFacultad de CienciasHongos filamentososPacientes inmunocomprometidosIdentificaciónProtocoloExtracción de proteínasMALDI-TOF/MSBacteriología - Tesis y disertaciones académicasHongos filamentososEstablecimiento de Protocolos Operativos Estándar (POE) para la identificación de hongos filamentosos patógenos para el humano relacionados con los filos Ascomycota y Mucoromycota por la tecnología MALDI-TOF /MSTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALProyecto MALDI-TOF Natalia Prieto 2018.pdfapplication/pdf1963685http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/1/Proyecto%20MALDI-TOF%20Natalia%20Prieto%202018.pdf9bd1262c0de2e3d0250598f493592522MD51open accessautorizacion.pdfapplication/pdf202604http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/2/autorizacion.pdfabc729eaa5af2c5bfdbd16e02f175d1dMD52metadata only accessanexo 6.pdfapplication/pdf328785http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/3/anexo%206.pdf5df24495952bb5ccd6434f7c02693cfaMD53metadata only accessImagen (12).pdfCartasapplication/pdf86525http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/4/Imagen%20%2812%29.pdfed1f71be6684c11105c0457133ced7a0MD54metadata only accessTHUMBNAILProyecto MALDI-TOF Natalia Prieto 2018.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2620http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/5/Proyecto%20MALDI-TOF%20Natalia%20Prieto%202018.pdf.jpgcdc6cc12ab456aa0bc8d6674bb70bff9MD55open accessautorizacion.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5415http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/6/autorizacion.pdf.jpge5597b861f4578dcc371ba9b3110720cMD56open accessanexo 6.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3125http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/7/anexo%206.pdf.jpg64bc895516f76ee478f63b97e6b43c5bMD57open accessImagen (12).pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2476http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/8/Imagen%20%2812%29.pdf.jpg9f069e50f3c8d7067325ed733a412005MD58open accessLICENSElicense.txttext/plain2603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39204/9/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD59open access10554/39204oai:repository.javeriana.edu.co:10554/392042022-05-03 09:15:04.426Repositorio Institucional - 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