Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9
INTRODUCCIÓN: Candida glabrata es una levadura oportunista que causa infecciones fúngicas invasivas en pacientes inmunosuprimidos con una tasa de mortalidad muy alta debido a la resistencia que este microorganismo ha desarrollado a los antifúngicos; esta levadura posee MIC muy alta para fluconazol,...
- Autores:
-
Amado Amado, Daniela
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/39156
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/39156
- Palabra clave:
- Candida glabrata
CRISPR-Cas9
CRZ1
caspofungina
resistencia
patogenicidad
Candida glabrata
CRISPR-Cas9
CRZ1
caspofungin
resistance
pathogenicity
Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas
Patogenicidad
- Rights
- openAccess
- License
- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
| id |
JAVERIANA2_24005699256e7673aea70ce1df8cc532 |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:repository.javeriana.edu.co:10554/39156 |
| network_acronym_str |
JAVERIANA2 |
| network_name_str |
Repositorio Universidad Javeriana |
| repository_id_str |
|
| dc.title.spa.fl_str_mv |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| title |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| spellingShingle |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungina resistencia patogenicidad Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungin resistance pathogenicity Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas Patogenicidad |
| title_short |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| title_full |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| title_fullStr |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| title_full_unstemmed |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| title_sort |
Construcción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9 |
| dc.creator.fl_str_mv |
Amado Amado, Daniela |
| dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv |
Parra Giraldo, Claudia Marcela |
| dc.contributor.author.none.fl_str_mv |
Amado Amado, Daniela |
| dc.contributor.evaluator.none.fl_str_mv |
Rodríguez Leguizamón, Giovanni Antonio Montaña Lara, Jose Salvador |
| dc.subject.spa.fl_str_mv |
Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungina resistencia patogenicidad |
| topic |
Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungina resistencia patogenicidad Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungin resistance pathogenicity Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas Patogenicidad |
| dc.subject.keyword.spa.fl_str_mv |
Candida glabrata CRISPR-Cas9 CRZ1 caspofungin resistance pathogenicity |
| dc.subject.armarc.spa.fl_str_mv |
Bacteriología - Tesis y disertaciones académicas Patogenicidad |
| description |
INTRODUCCIÓN: Candida glabrata es una levadura oportunista que causa infecciones fúngicas invasivas en pacientes inmunosuprimidos con una tasa de mortalidad muy alta debido a la resistencia que este microorganismo ha desarrollado a los antifúngicos; esta levadura posee MIC muy alta para fluconazol, y en los últimos años se han aislados cepas resistentes a la caspofungina (equinocandina de elección como tratamiento de primera línea) debido a mutaciones en genes FKS cuya sobreexpresión es mediada por la vía Calcineurina/Calmodulina. Por lo anterior se hace necesario realizar una mutante del factor de transcripción CRZ1 y evidenciar retornar de un fenotipo resistente a sensible. OBJETIVO: Obtener mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina aisladas de muestras clínicas para el factor de transcripción CRZ1 mediante el sistema CRISPR-Cas9. METODOLOGÍA: se realizó una búsqueda informática de la literatura sobre el sistema CRISPR-Cas en levaduras. Además, se diseñó un plásmido con la secuencia del sgRNA complementario a una fracción de la secuencia del gen CRZ1, y con el sistema CRISPR-Cas9 para transfectar las levaduras y seleccionar las cepas mutadas a través de un marcador de selección fluorescente. RESULTADOS: En la búsqueda sistemática se analizaron 39 artículos en los cuales, se obtuvo información sobre el sistema CRISPR-Cas en levaduras de importancia clínica e industrial, se documentó las variantes descritas en levaduras para el uso del sistema CRISPR/Cas. La construcción bioinformática de C. glabrata, se obtuvieron dos sgRNA con score de 89 y 71%, un mapa del constructo del plásmido con el sistema CRISPR más el marcador YFP y el SgRNA, la generación del mutante no se logró realizar por incumplimiento de la casa comercial. CONCLUSIÓN: El sistema CRISPR es un sistema muy versátil y eficientes, que permite realizar la edición del genoma de diferentes organismos celulares. Para lograr el éxito de la edición, es muy importante un buen diseño bioinformática que garantice la especificidad del sistema, y el reconocimiento adecuado de la Cas9 de la secuencia diana que se quiere editar. |
| publishDate |
2018 |
| dc.date.accessioned.none.fl_str_mv |
2018-12-10T13:38:38Z 2020-04-15T15:50:39Z |
| dc.date.available.none.fl_str_mv |
2018-12-10T13:38:38Z 2020-04-15T15:50:39Z |
| dc.date.created.none.fl_str_mv |
2018-11-30 |
| dc.type.local.spa.fl_str_mv |
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado |
| dc.type.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.type.driver.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| format |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.identifier.uri.none.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/10554/39156 |
| dc.identifier.instname.spa.fl_str_mv |
instname:Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.identifier.reponame.spa.fl_str_mv |
reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.identifier.repourl.spa.fl_str_mv |
repourl:https://repository.javeriana.edu.co |
| url |
http://hdl.handle.net/10554/39156 |
| identifier_str_mv |
instname:Pontificia Universidad Javeriana reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana repourl:https://repository.javeriana.edu.co |
| dc.language.iso.spa.fl_str_mv |
spa |
| language |
spa |
| dc.rights.licence.*.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional |
| dc.rights.uri.*.fl_str_mv |
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
| dc.rights.accessrights.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
| dc.rights.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| rights_invalid_str_mv |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| eu_rights_str_mv |
openAccess |
| dc.format.spa.fl_str_mv |
PDF |
| dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv |
application/pdf |
| dc.publisher.spa.fl_str_mv |
Pontificia Universidad Javeriana |
| dc.publisher.program.spa.fl_str_mv |
Bacteriología |
| dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv |
Facultad de Ciencias |
| institution |
Pontificia Universidad Javeriana |
| bitstream.url.fl_str_mv |
http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/1/license.txt http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/2/Trabajo%20de%20Grado%20Daniela%20Amado%20documento%20completo.pdf.jpg http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/3/Carta_de_autorizacion%20copia.pdf.jpg http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/4/anexo%206%20carta%20direccion%20.pdf.jpg http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/5/Trabajo%20de%20Grado%20Daniela%20Amado%20documento%20completo.pdf http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/6/Carta_de_autorizacion%20copia.pdf http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/7/anexo%206%20carta%20direccion%20.pdf |
| bitstream.checksum.fl_str_mv |
2070d280cc89439d983d9eee1b17df53 da76f85dc555ba5aa5cd8a021f12c0ca af7be08367b2733449293994109ff956 5c16fd3e0801120890765d9a8e9497f5 d11e7853097df75e727f7346ffaebb66 238e4e45306f24c86e9ab84ea86cf076 04b1f13053ae3f0f252fc8f2a29353e3 |
| bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 |
| repository.name.fl_str_mv |
Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana |
| repository.mail.fl_str_mv |
repositorio@javeriana.edu.co |
| _version_ |
1811671121538318336 |
| spelling |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Parra Giraldo, Claudia MarcelaAmado Amado, DanielaRodríguez Leguizamón, Giovanni AntonioMontaña Lara, Jose Salvador2018-12-10T13:38:38Z2020-04-15T15:50:39Z2018-12-10T13:38:38Z2020-04-15T15:50:39Z2018-11-30http://hdl.handle.net/10554/39156instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coINTRODUCCIÓN: Candida glabrata es una levadura oportunista que causa infecciones fúngicas invasivas en pacientes inmunosuprimidos con una tasa de mortalidad muy alta debido a la resistencia que este microorganismo ha desarrollado a los antifúngicos; esta levadura posee MIC muy alta para fluconazol, y en los últimos años se han aislados cepas resistentes a la caspofungina (equinocandina de elección como tratamiento de primera línea) debido a mutaciones en genes FKS cuya sobreexpresión es mediada por la vía Calcineurina/Calmodulina. Por lo anterior se hace necesario realizar una mutante del factor de transcripción CRZ1 y evidenciar retornar de un fenotipo resistente a sensible. OBJETIVO: Obtener mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina aisladas de muestras clínicas para el factor de transcripción CRZ1 mediante el sistema CRISPR-Cas9. METODOLOGÍA: se realizó una búsqueda informática de la literatura sobre el sistema CRISPR-Cas en levaduras. Además, se diseñó un plásmido con la secuencia del sgRNA complementario a una fracción de la secuencia del gen CRZ1, y con el sistema CRISPR-Cas9 para transfectar las levaduras y seleccionar las cepas mutadas a través de un marcador de selección fluorescente. RESULTADOS: En la búsqueda sistemática se analizaron 39 artículos en los cuales, se obtuvo información sobre el sistema CRISPR-Cas en levaduras de importancia clínica e industrial, se documentó las variantes descritas en levaduras para el uso del sistema CRISPR/Cas. La construcción bioinformática de C. glabrata, se obtuvieron dos sgRNA con score de 89 y 71%, un mapa del constructo del plásmido con el sistema CRISPR más el marcador YFP y el SgRNA, la generación del mutante no se logró realizar por incumplimiento de la casa comercial. CONCLUSIÓN: El sistema CRISPR es un sistema muy versátil y eficientes, que permite realizar la edición del genoma de diferentes organismos celulares. Para lograr el éxito de la edición, es muy importante un buen diseño bioinformática que garantice la especificidad del sistema, y el reconocimiento adecuado de la Cas9 de la secuencia diana que se quiere editar.INTRODUCTION: Candida glabrata is an opportunistic yeast that causes invasive fungal infections in immunosuppressed patients with a very high mortality rate due to the resistance that this microorganism has developed to antifungals; This yeast is very useful for the use of the word castrofungin. Therefore, it is necessary to carry out a mutation of the transcription factor CRZ1 and to show a phenomenon resistant to a sensitive one. OBJECTIVE: To obtain mutants of Candida glabrata in a Caspofungin, in a sample of samples for the transcription factor CRZ1 through the CRISPR-Cas9 system. METHODOLOGY: a computer search of the literature on the CRISPR-Cas system in yeast was carried out. In addition, a plasmid was designed with the sequence of the complementary sgRNA and a part of the CRZ1 gene sequence, and with the CRISPR-Cas9 system for the treatment of the yeasts and the selection of the mutated strains through a fluorescent selection marker. . RESULTS: In the systematic search, 39 articles will be analyzed in which information on the CRISPR-Cas system will be obtained in yeasts of clinical and industrial importance, the variants described in yeasts will be documented for the use of the CRISPR / Cas system. The bioinformatic construction of C. glabrata, we obtained two sgRNA with a score of 89 and 71%, a map of the plasmid construct with the CRISPR system plus the YFP marker and the SgRNA, the generation of the mutant can not be performed on the contrary Comercial House. CONCLUSION: The CRISPR system is a very versatile and efficient system that allows the editing of the genome of different cellular organisms. To achieve the success of the edition, a good bioinformatic design is very important that guarantees the specificity of the system, and the adequate recognition of the Casina of the sequence.Bacteriólogo (a)PregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaBacteriologíaFacultad de CienciasCandida glabrataCRISPR-Cas9CRZ1caspofunginaresistenciapatogenicidadCandida glabrataCRISPR-Cas9CRZ1caspofunginresistancepathogenicityBacteriología - Tesis y disertaciones académicasPatogenicidadConstrucción de mutantes de Candida glabrata resistentes a Caspofungina para el factor de transcripción CRZ1 de la vía Calmodulina/Calcineurina mediante el sistema CRISPR-Cas9Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisLICENSElicense.txttext/plain2603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/1/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD51open accessTHUMBNAILTrabajo de Grado Daniela Amado documento completo.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3247http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/2/Trabajo%20de%20Grado%20Daniela%20Amado%20documento%20completo.pdf.jpgda76f85dc555ba5aa5cd8a021f12c0caMD52open accessCarta_de_autorizacion copia.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5744http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/3/Carta_de_autorizacion%20copia.pdf.jpgaf7be08367b2733449293994109ff956MD53open accessanexo 6 carta direccion .pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg4368http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/4/anexo%206%20carta%20direccion%20.pdf.jpg5c16fd3e0801120890765d9a8e9497f5MD54open accessORIGINALTrabajo de Grado Daniela Amado documento completo.pdfTrabajo de gradoapplication/pdf4072626http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/5/Trabajo%20de%20Grado%20Daniela%20Amado%20documento%20completo.pdfd11e7853097df75e727f7346ffaebb66MD55open accessCarta_de_autorizacion copia.pdfCarta autorizacionapplication/pdf334848http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/6/Carta_de_autorizacion%20copia.pdf238e4e45306f24c86e9ab84ea86cf076MD56metadata only accessanexo 6 carta direccion .pdfAnexo 6 carta dirección de carrera Bacteriologíaapplication/pdf246066http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/39156/7/anexo%206%20carta%20direccion%20.pdf04b1f13053ae3f0f252fc8f2a29353e3MD57metadata only access10554/39156oai:repository.javeriana.edu.co:10554/391562022-05-03 11:34:39.451Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepositorio@javeriana.edu.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 |