Expresión como proteína recombinante de dos fragmentos de alta unión a células b de la glicoproteina 350 (gp350) del virus de epstein-barr en escherichia coli
El virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp3...
- Autores:
-
Soto de León, Sara Cecilia
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2009
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/11863
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/11863
- Palabra clave:
- Células B
B Cells
Virus recombinantes
Biología - Tesis y disertaciones académicas
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- openAccess
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- Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
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El virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp350, la cual se une al receptor CR2 (CD21) de los linfocitos B. En este trabajo se obtuvieron como proteínas recombinantes, tres péptidos identificados como los directamente implicados en el contacto gp350-CR2. En el fragmento denominado VEBI se incluyeron dos péptidos ubicados hacia el extremo N-terminal de gp350, mientras que el fragmento II o VEBII incluye un péptido localizado cerca de la región C-terminal de dicha proteína. La expresión de estos fragmentos se realizó en Escherichia coli y luego de corroborar por secuenciación la integridad de los mismos se identificó la cepa GD1 como la cepa molde que dio lugar a las construcciones plasmídicas. Se obtuvo un 0.6% aproximadamente de proteína pura para VEBI y cerca del 9.4% para VEBII, del total de lisado bacteriano de E. coli. La proteína recombinante obtenida, que incluye los péptidos localizados hacia el extremo N-terminal, puede ser de gran ayuda para diferentes ensayos pues luego de su obtención en E. coli, su conformación estructural podría no diferir mucho de su conformación nativa. Sería necesario realizar más predicciones con la finalidad de demostrar lo anterior para VEBII pues no existe un predictor de glicosilación exclusivo para proteínas virales. Las proteínas recombinantes que incluyen los fragmentos de alta unión a células B, se lograron producir y purificar en buena cantidad, a partir de su expresión en un sistema heterólogo como lo es E. coli. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Patarroyo Gutiérrez, Manuel AlfonsoMonguí Cruz, ÁlvaroSoto de León, Sara Cecilia2015-01-17T21:45:33Z2016-03-29T14:28:04Z2020-04-15T16:12:27Z2015-01-17T21:45:33Z2016-03-29T14:28:04Z2020-04-15T16:12:27Z2009http://hdl.handle.net/10554/11863instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coEl virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp350, la cual se une al receptor CR2 (CD21) de los linfocitos B. En este trabajo se obtuvieron como proteínas recombinantes, tres péptidos identificados como los directamente implicados en el contacto gp350-CR2. En el fragmento denominado VEBI se incluyeron dos péptidos ubicados hacia el extremo N-terminal de gp350, mientras que el fragmento II o VEBII incluye un péptido localizado cerca de la región C-terminal de dicha proteína. La expresión de estos fragmentos se realizó en Escherichia coli y luego de corroborar por secuenciación la integridad de los mismos se identificó la cepa GD1 como la cepa molde que dio lugar a las construcciones plasmídicas. Se obtuvo un 0.6% aproximadamente de proteína pura para VEBI y cerca del 9.4% para VEBII, del total de lisado bacteriano de E. coli. La proteína recombinante obtenida, que incluye los péptidos localizados hacia el extremo N-terminal, puede ser de gran ayuda para diferentes ensayos pues luego de su obtención en E. coli, su conformación estructural podría no diferir mucho de su conformación nativa. Sería necesario realizar más predicciones con la finalidad de demostrar lo anterior para VEBII pues no existe un predictor de glicosilación exclusivo para proteínas virales. Las proteínas recombinantes que incluyen los fragmentos de alta unión a células B, se lograron producir y purificar en buena cantidad, a partir de su expresión en un sistema heterólogo como lo es E. coli.The Epstein-Barr virus (HHV-4) is a herpesvirus with exclusive tropism for human cells. Following an initial infection, virions produced during the lytic replication cycle infect mainly B cells. This is mediated by the initial recognition of the gp350 glycoprotein, which binds to the B lymphocyte CRD receptor (CDD21). In this work, we obtained three peptides identified to be directly implicated in the gp350-CR2 contact as recombinant proteins. The fragment designated as EBVI contained two peptides located towards the gp350 s N-terminal region, while fragment II or EBVII included a peptide localized near the protein s C-terminal region. These fragments were expressed in Escherichia coli and following the verification of their integrity by sequencing, the GD1 strain was identified as the template for plasmid constructs. Approximately 0.6% of pure EBVI and nearly 9.4% of pure EBVII out of the total E. coli protein content were obtained. The recombinant protein harboring the N-terminal peptides can be useful for different assays since its structural conformation might not vary from its native conformation after being isolated from E. co li. More predictions would be necessary to corroborate the latter suggestion for EBVII since a glycosylation predictor exclusive for viral proteins is not available. The recombinant proteins harboring fragments binding with high ability to B cells were produced and purified in good quantities by expressing them in the E. coli heterologous system.Biólogo (a)PregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaBiologíaFacultad de CienciasCélulas BB CellsVirus recombinantesBiología - Tesis y disertaciones académicasExpresión como proteína recombinante de dos fragmentos de alta unión a células b de la glicoproteina 350 (gp350) del virus de epstein-barr en escherichia coliTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALSotodeLeonSaraCecilia2009.pdfapplication/pdf8286449http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/11863/1/SotodeLeonSaraCecilia2009.pdffd66772f68cdbc2ce3681138d31d8dfaMD51open accessTHUMBNAILSotodeLeonSaraCecilia2009.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2361http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/11863/2/SotodeLeonSaraCecilia2009.pdf.jpgd0bed9f06967d1db9de73db15e35c5ccMD52open access10554/11863oai:repository.javeriana.edu.co:10554/118632022-05-03 14:32:06.208Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepositorio@javeriana.edu.co |