Potencial efecto del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo sobre astrocitos humanos en un modelo in vitro de scratch y privación de glucosa
Diferentes patologías y lesiones afectan el normal funcionamiento del sistema nervioso central (SNC). Patologías neurodegenerativas como Parkinson y Alzheimer o aquellas traumáticas como la isquemia, la lesión cerebral o la neuroinflamación representan una alta morbilidad en la población mundial. La...
- Autores:
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Báez Jurado, Eliana María
- Tipo de recurso:
- Doctoral thesis
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
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- Palabra clave:
- Tejido adiposo
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Diferentes patologías y lesiones afectan el normal funcionamiento del sistema nervioso central (SNC). Patologías neurodegenerativas como Parkinson y Alzheimer o aquellas traumáticas como la isquemia, la lesión cerebral o la neuroinflamación representan una alta morbilidad en la población mundial. La mayoría de las lesiones alteran el correcto funcionamiento de las células cerebrales lo que implica la modificación del microambiente, respuestas alteradas o expresión de genes y proteínas frente al insulto. Los astrocitos son las células gliales más abundantes del sistema nervioso, dentro de sus funciones están: brindar un soporte metabólico y estructural a las neuronas, con lo cual contribuyen a su normal funcionamiento. Recientes estudios han evidenciado el papel fundamental que estas células tienen en la protección neuronal sobre todo en las lesiones traumáticas, patologías en las cuales se presentan cambios bioquímicos y moleculares que conllevan a un daño neuronal, seguido por la pérdida de funciones cognitivas y motoras. A pesar de considerar los astrocitos más resistentes que las neuronas a insultos cerebrales, pocos estudios ofrecen una idea de cómo los cambios en las funciones astrocíticas pueden llevar a la pérdida de la protección después de una lesión cerebral. En este punto y conociendo la importancia de los astrocitos, la hipótesis de esta investigación es que el daño mitocondrial causado en los astrocitos durante la lesión cerebral deteriora su funcionamiento y puede contribuir a la pérdida neuronal. Evidencias recientes muestran que el uso del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano (CM-hMSCA) puede proporcionar un efecto protector que contrarresta el daño cerebral. Sin embargo, son muy pocos los estudios que han evaluado el efecto del CM-hMSCA en la protección de los astrocitos expuestos a scratch y privación de glucosa como posible alternativa terapéutica o de prevención en la lesión cerebral, así como en otras patologías. Nuestros resultados indicaron que CM-hMSCA mejoró la viabilidad celular, redujo la fragmentación nuclear, atenuó la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y preservó el potencial de membrana mitocondrial y los parámetros ultraestructurales. Adicionalmente, se demostró que el CM-hMSCA regula las citocinas IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, TNF-alfa y también regula negativamente el calcio a nivel citoplásmico y tiene un efecto sobre la regulación de la dinámica mitocondrial y cadena respiratoria. Estas acciones están acompañadas por la regulación de la expresión de diferentes proteínas implicadas en vías de señalización como AKT/pAKT, ERK1/2/pERK, e incluso puede mediar la localización de Neuroglobina (Ngb) a nivel celular. Por otro lado, para caracterizar el mecanismo protector del CM-hMSCA, nuestros resultados revelan un aumento en la expresión de la neuroglobina y el silenciamiento genético de esta proteína reduce la acción protectora de CM-hMSCA en las células lesionadas. Por último, nosotros también realizamos una validación del modelo en astrocitos humanos, encontrando resultados similares en la protección y preservación de los astrocitos por el CM-hMSCA. Nuestros resultados sugieren que el tratamiento con CM-hMSCA podría ser una estrategia terapéutica prometedora para la protección de las células astrocíticas en las patologías cerebrales y que posiblemente la neuroglobina está mediando este efecto protector del CM-hMSCA. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Barreto, GeorgeBáez Jurado, Eliana MaríaGiráldez, LisandroTapia, SilviaTurner, Liliana FrancisLamprea, MarisolCapani, Franscisco2019-03-15T13:39:57Z2020-04-16T14:53:03Z2019-03-15T13:39:57Z2020-04-16T14:53:03Z2018-12-11http://hdl.handle.net/10554/41814https://doi.org/10.11144/Javeriana.10554.41814instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coDiferentes patologías y lesiones afectan el normal funcionamiento del sistema nervioso central (SNC). Patologías neurodegenerativas como Parkinson y Alzheimer o aquellas traumáticas como la isquemia, la lesión cerebral o la neuroinflamación representan una alta morbilidad en la población mundial. La mayoría de las lesiones alteran el correcto funcionamiento de las células cerebrales lo que implica la modificación del microambiente, respuestas alteradas o expresión de genes y proteínas frente al insulto. Los astrocitos son las células gliales más abundantes del sistema nervioso, dentro de sus funciones están: brindar un soporte metabólico y estructural a las neuronas, con lo cual contribuyen a su normal funcionamiento. Recientes estudios han evidenciado el papel fundamental que estas células tienen en la protección neuronal sobre todo en las lesiones traumáticas, patologías en las cuales se presentan cambios bioquímicos y moleculares que conllevan a un daño neuronal, seguido por la pérdida de funciones cognitivas y motoras. A pesar de considerar los astrocitos más resistentes que las neuronas a insultos cerebrales, pocos estudios ofrecen una idea de cómo los cambios en las funciones astrocíticas pueden llevar a la pérdida de la protección después de una lesión cerebral. En este punto y conociendo la importancia de los astrocitos, la hipótesis de esta investigación es que el daño mitocondrial causado en los astrocitos durante la lesión cerebral deteriora su funcionamiento y puede contribuir a la pérdida neuronal. Evidencias recientes muestran que el uso del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano (CM-hMSCA) puede proporcionar un efecto protector que contrarresta el daño cerebral. Sin embargo, son muy pocos los estudios que han evaluado el efecto del CM-hMSCA en la protección de los astrocitos expuestos a scratch y privación de glucosa como posible alternativa terapéutica o de prevención en la lesión cerebral, así como en otras patologías. Nuestros resultados indicaron que CM-hMSCA mejoró la viabilidad celular, redujo la fragmentación nuclear, atenuó la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y preservó el potencial de membrana mitocondrial y los parámetros ultraestructurales. Adicionalmente, se demostró que el CM-hMSCA regula las citocinas IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, TNF-alfa y también regula negativamente el calcio a nivel citoplásmico y tiene un efecto sobre la regulación de la dinámica mitocondrial y cadena respiratoria. Estas acciones están acompañadas por la regulación de la expresión de diferentes proteínas implicadas en vías de señalización como AKT/pAKT, ERK1/2/pERK, e incluso puede mediar la localización de Neuroglobina (Ngb) a nivel celular. Por otro lado, para caracterizar el mecanismo protector del CM-hMSCA, nuestros resultados revelan un aumento en la expresión de la neuroglobina y el silenciamiento genético de esta proteína reduce la acción protectora de CM-hMSCA en las células lesionadas. Por último, nosotros también realizamos una validación del modelo en astrocitos humanos, encontrando resultados similares en la protección y preservación de los astrocitos por el CM-hMSCA. Nuestros resultados sugieren que el tratamiento con CM-hMSCA podría ser una estrategia terapéutica prometedora para la protección de las células astrocíticas en las patologías cerebrales y que posiblemente la neuroglobina está mediando este efecto protector del CM-hMSCA.Pontificia Universidad JaverianaDifferent pathologies and injuries affect the normal functioning of the central nervous system (CNS). Neurodegenerative pathologies such as Parkinson's and Alzheimer's or those traumatic such as ischemia, brain injury or neuroinflammation represent a high morbidity in the world population. Most lesions disrupt the proper functioning of brain cells which involves modification of the microenvironment, altered responses or expression of genes and proteins against insult. Astrocytes are the most abundant glial cells of the nervous system, within their functions are: provide a metabolic and structural support to neurons, thereby contributing to their normal functioning. Recent studies have shown the fundamental role of these cells in neuronal protection, especially in traumatic lesions, pathologies in which biochemical and molecular changes occur that lead to neuronal damage, followed by the loss of cognitive and motor functions. Despite considering astrocytes more resistant than neurons to brain insults, few studies offer an idea of how changes in astrocytic functions can lead to loss of protection after a brain injury. At this point and knowing the importance of astrocytes, the hypothesis of this research is that mitochondrial damage caused in astrocytes during brain injury impairs their functioning and may contribute to neuronal loss. Recent evidence shows that the use of conditioned medium from mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue (CM-hMSCA) can provide a protective effect that counteracts brain damage. However, there are very few studies that have evaluated the effect of CM-hMSCA in the protection of astrocytes exposed to scratch and glucose deprivation as a possible therapeutic alternative or prevention in brain injury, as well as in other pathologies. Our results indicated that CM-hMSCA improved cell viability, reduced nuclear fragmentation, attenuated the production of reactive oxygen species (ROS) and preserved mitochondrial membrane potential and ultrastructural parameters. Additionally, it was demonstrated that CM-hMSCA regulates the cytokines IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, TNF-alpha and also negatively regulates calcium at the cytoplasmic level and has an effect on the regulation of mitochondrial dynamics and respiratory chain. These actions are accompanied by the regulation of the expression of different proteins involved in signaling pathways such as AKT/pAKT, ERK1/2/pERK, and can even mediate the localization of Neuroglobin (Ngb) at the cellular level. On the other hand, to characterize the protective mechanism of CM-hMSCA, our results reveal an increase in the expression of neuroglobin and the genetic silencing of this protein reduces the protective action of CM-hMSCA in the injured cells. Finally, we also performed a validation of the model in human astrocytes, finding similar results in the protection and preservation of astrocytes by the CM-hMSCA. Our results suggest that treatment with CM-hMSCA could be a promising therapeutic strategy for the protection of astrocytic cells in brain pathologies and that neuroglobin is possibly mediating this protective effect of CM-hMSCA.Doctor en Ciencias BiológicasDoctoradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaDoctorado en Ciencias BiológicasFacultad de CienciasTejido adiposoMedio condicionadoCélulas madre mesenquimalesNeuroglobinaScratchLesión cerebralAstrocitos humanosMigraciónAdipose tissueConditioned mediumMesenchymal stem cellsNeuroglobinScratch assayBrain injuryHuman astrocytesMigrationDoctorado en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicasTejido adiposoAstrocitosPotencial efecto del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo sobre astrocitos humanos en un modelo in vitro de scratch y privación de glucosaTesis/Trabajo de grado - Monografía - Doctoradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06info:eu-repo/semantics/doctoralThesisORIGINALDocumentoFinal_Marzo2019VF.pdfDocumentoapplication/pdf4747413http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/1/DocumentoFinal_Marzo2019VF.pdf50b192bfd8a5b3575f36fb92132d9d4bMD51open accessBaez-Jurado2018_Article1.pdfBaez-Jurado2018_Article1application/pdf7519306http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/2/Baez-Jurado2018_Article1.pdf6ab0d0a745ec3f8de8e804071df5ad6dMD52open accessBaez-Jurado2018_Article2.pdfBaez-Jurado2018_Article2application/pdf9464319http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/3/Baez-Jurado2018_Article2.pdf82b860fa24d9a33735c6d0f9b0f78e98MD53open accessCarta_de_autorizacion_EMBJ.pdfLicencia de usoapplication/pdf363795http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/4/Carta_de_autorizacion_EMBJ.pdfbc7a982c983c387b95510a5542765e17MD54metadata only accessLICENSElicense.txttext/plain2603http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/5/license.txt2070d280cc89439d983d9eee1b17df53MD55open accessTHUMBNAILDocumentoFinal_Marzo2019VF.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3062http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/6/DocumentoFinal_Marzo2019VF.pdf.jpgc7100deee928fff69830aea9304934d0MD56open accessBaez-Jurado2018_Article1.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg6886http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/7/Baez-Jurado2018_Article1.pdf.jpg9e73900457aebb1c86be3e1d7f5d87dcMD57open accessBaez-Jurado2018_Article2.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg6659http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/8/Baez-Jurado2018_Article2.pdf.jpgc691175054f39e66eb0d99fa26dcc3aaMD58open accessCarta_de_autorizacion_EMBJ.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5348http://repository.javeriana.edu.co/bitstream/10554/41814/9/Carta_de_autorizacion_EMBJ.pdf.jpg23935fea43391134b14d48b4531a1cf5MD59open access10554/41814oai:repository.javeriana.edu.co:10554/418142022-04-29 13:17:54.03Repositorio Institucional - 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