Evaluación de la modulación de los Receptores Tipo Toll en la infección por Virus Dengue. (2011)
La infección por el virus Dengue (DENV) desencadena un amplio espectro de sintomatología clínica que va desde una fiebre indiferenciada (Dengue clásico), hasta manifestaciones severas y potencialmente fatales como el Dengue Hemorrágico y el síndrome de choque por Dengue (DH/SCD). La aparición del DH/SCD está asociada con un desbalance en la respuesta inmune, caracterizada por alta producción de citocinas/quimiocinas, que favorecen el daño celular (endotelio), aumentando la permeabilidad vascular. Los mecanismos que inducen la cascada de citocinas en el DH/SCD, son controversiales, y el papel de la inmunidad innata en este proceso no ha sido estudiado. En este sentido, los receptores tipo Toll (TLR), un componente de la inmunidad innata encargado del reconocimiento de patógenos a través de los PAMPs (del inglés Pathogen Associated Molecular Patterns), constituyen un blanco atractivo para la comprensión de los mecanismos inmunopatogénicos del DH/SCD. Según estudios realizados previamente en modelos murinos infectados con virus del oeste del Nilo (Flavivirus); se ha reportado que ratones con disminución en la expresión de TLR3 son menos susceptibles a desarrollar inflamación del sistema nervioso; igualmente se ha podido relacionar el reconocimiento de moléculas endógenas por parte de los TLR como una vía implicada en el desarrollo de procesos inflamatorios en autoinmunidad, dicha información nos alienta a evaluar el papel de la inmunidad innata, específicamente de los TLR como posibles elementos involucrados en protección o inmunopatogénesis del DENV. Este tipo de estudios, son de vital importancia y de ejecución prioritaria, si se tiene en cuenta que Colombia, y en particular el Departamento de Antioquia, es una de las regiones con mayor incidencia de casos de infección por DENV. Desde el punto de vista científico, la ejecución de este tipo de proyectos, permitirá dar los primeros pasos hacia la comprensión de la relación virus/TLR, ya que actualmente no existe estudios orientados a determinar el impacto de los TLR en la infección por DENV, y mucho menos, el compromiso de dichos receptores en las alteraciones de la respuesta inmune inducidas en la infección por DENV, y que pueden ser letales. Interesados en esta problemática, en el último año hemos venido trabajando este interesante tema. Nuestros resultados preliminares muestran que el nivel de expresión del TLR2 y TLR4, disminuyen drásticamente tanto en las mDC, como en las pDC, obtenidas de pacientes infectados por DENV. Sin embargo, hasta el momento hemos evaluado una población muy pequeña (10 pacientes), por lo cual, con el presente proyecto se pretende evaluar la misma población de células, pero de 40 individuos infectados. Además, este tipo de estudios será complementado con estudios in vitro; es decir, se tomará CMSP de pacientes sanos y serán estimulados con DENV in vitro a diferentes dosis infecciosas y luego se determinará el nivel de expresión de los TLR por citometría de flujo y, el mRNA de los mismos receptores será cuantificado por RT-PCR en tiempo real. Adicionalmente, se cuantificará el nivel de producción de varias citocinas pro-inflamatorias y quimiocinas, para determinar si están implicadas en la respuesta a la estimulación por DENV y al tratamiento con agonistas de los TLR, como un indicador de la función de estos receptores.