Caracterización de factores proteicos asociados a la regulación de la proteína mLYT1 de Trypanosoma cruzi. (2018)
La enfermedad de Chagas es un problema de salud pública global que afecta a millones de personas en América Latina y cientos de miles en el mundo entero (Kirchhoff, 2011). Actualmente, para su tratamiento, solamente existen dos medicamentos disponibles, el benzonidazol (Rochagán ®) y el nifurtimox (Lampit ®), los cuales si bien son efectivos en el tratamiento de Chagas congénito en niños recién nacidos, pacientes en fase aguda y pacientes jóvenes asintomáticos, en pacientes crónicos sintomáticos su eficacia no ha sido plenamente corroborada. Ambos medicamentos presentan, además, toxicidad hepática y renal, requieren de períodos prolongados de administración y presentan eventos adversos como anorexia, vómito, irritabilidad, cefalea y leucopenia (Altcheh et al., 2005; 2011). Además, existen reportes de resistencia desarrollada experimentalmente por el parásito tanto in vitro (Nogueira et al., 2009), como in vivo en modelos animales (Dos Santos et al., 2008). Complicando el anterior escenario, actualmente se carece de vacunas o inmunoterapias que ayuden al control de este parásito flagelado; siendo el control vectorial y el tamizaje en bancos de sangre, las únicas medidas de prevención disponibles. Por lo anterior, la necesidad de estudiar nuevos posibles blancos parasitarios para el diseño de nuevos fármacos u optimización de los ya existentes es una de las prioridades en investigación en la enfermedad de Chagas. En esta propuesta se plantea el estudio de factores proteicos asociados a las regiones no traducidas (UTR) 5´y 3´ de los ARN mensajeros codificantes para la proteína mLYT1 que sean potenciales reguladores de su expresión. Conocimiento básico que puede ser usado en un futuro para el desarrollo de fármacos antiparasitarios. Se seleccionó el estudio de los factores que regulan esta proteína debido a su participación en el proceso de invasión de las células del hospedero mamífero (formación de poros de la vacuola fagolisosómica, ayudando así al escape del parásito al citosol y a su subsecuente replicación, (Manning-Cela et al., 2001), en conjunto con los reportes de Zago y colaboradores (2008) que muestran, en un modelo murino, que la infección del parásito se ve comprometida al usar mutantes carentes de este gen. Más aún, ensayos de inmunización genética con el gen codificante para esta proteína, revelan protección de los ratones frente al reto con el parásito (Fralish & Tarleton, 2003). Así, el objetivo general de esta propuesta se centra en la identificación de proteínas asociadas a las regiones UTR 5 y 3 de los ARN mensajeros de la proteína mLYT1 de Trypanosoma cruzi. Aproximación experimental en la cual nuestro laboratorio tiene experiencia a través del desarrollo del proyecto financiado por Colciencias Caracterización de factores asociados a secuencias reguladoras de la expresión de la proteína de choque térmico de 70 kDa (HSP70) de Leishmania braziliensis"", código No. 120340520233 (Ramírez et al., 2012). Los objetivos específicos planteados y su aproximación experimental son: (1) Aislar y detectar proteínas unidas a las regiones 5´y 3´ UTR de los ARN mensajeros de los genes codificantes para la proteína LYT1 en formas epimastigotas y tripomastigotas de T. cruzi mediante ensayos de pull-down seguidos de separación de las proteínas unidas a las UTR en geles en dos dimensiones, (2) Caracterizar las señales detectadas mediante espectrometría de masas de los puntos anteriormente obtenidos y comparar las proteínas identificadas entre los estadios epimastigotes y tripomastigotes del parásito mediante análisis bioinformáticos y (3) Confirmar la interacción de, al menos, una de las proteínas detectadas con las regiones UTR de mLYT1 mediante ensayos de retardo de movilidad electroforética (EMSA). Con este proyecto se espera avanzar en el conocimiento sobre la biología del parásito, en cuanto a la determinación de los factores proteicos asociados a las regiones 5´y 3´ UTR de los ARN mensajeros codificantes para ambas.