Apoyo en la validación de un protocolo aplicado para la obtención de plasma rico en plaquetas para su uso en la regeneración tisular en caninos realizado en el laboratorio clínico de la UCC

En los últimos años se han buscado alternativas como los concentrados autólogos plaquetarios capaces de generar respuestas favorables en los tejidos. Actualmente, existe diversidad de protocolos encontrados en la literatura para la obtención de PRP, por los cuales presentan requisitos adecuados a la...

Full description

Autores:: Salazar Robles, Kareen Daniella

Tipo de recurso:: Trabajo de grado de pregrado

Fecha de publicación:: 2023

Institución:: Universidad Cooperativa de Colombia

Repositorio:: Repositorio UCC

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description	En los últimos años se han buscado alternativas como los concentrados autólogos plaquetarios capaces de generar respuestas favorables en los tejidos. Actualmente, existe diversidad de protocolos encontrados en la literatura para la obtención de PRP, por los cuales presentan requisitos adecuados a las condiciones del laboratorio donde son confeccionados, razón por la cual la reproducción de estos protocolos, puede resultar no ser completamente precisa al momento de realizarse para nuevos estudios en condiciones diferentes, además del hecho de omitir u obviar detalles que pueden ser necesarios para reproducir el procedimiento (instrumentos / materiales empleados o en el procesamiento de muestras); considerando también que en su mayoría, estos artículos no se encuentran validados, generando posibles sesgos en los resultados obtenidos. Por esta razón se considera necesario implementar medidas protocolarias adheridas a la norma vigente para poder garantizar la validez de los procedimientos realizados en el laboratorio. En respuesta a esta problemática, en el presente trabajo se realizó una revisión y practica de diferentes protocolos para la obtención de PRP, considerando el POES para procedimiento de trabajo y protocolo de validación. Se concluye que el protocolo idóneo para su validación consiste en uno de centrifugación compuesta (280g’ 7 min/ 720g’ 5 min); cuyo material biológico (sangre) fue obtenida de un canino sano con peso de 15 kg. Se determinó que el método para la obtención del PRP cumple con una concentración ideal capaz de generar respuesta en la regeneración de tejidos.
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Gómez B, Rodríguez F, Díaz E. Fisiologìa Plaquetaria, Agregometría Plaquetaria y su Utilidad Clìnica. Med Int Méx. 2018; 34(2). Vizcaino G. Fisiología Plaquetaria. Avances en la Reactividad Plaquetaria. Revisión. Invest Clin. 1994; 35(1). Chicharro D, Rubio M, Damiá E, Carrillo JM, Cuervo B, Peláez P, et al. Platelet Rich Plasma: New Insights for Cutaneous Wound Healing Management. J. Funct. Biomater. 2018; 9(10). De la Fuente G. Fisiopatologìa de la inflamaciòn. 2004. Singer A, Clark R. Cutaneous Wound Healing. The New England Journal of Medicine. 1999; 341(10). Maxson , Lopez E, Yoo D, Miagkova A, Leroux M. Concise Review: Role of Mesenchymal Stem Cells in Wound Repair. Stem Cells Transl. Med. 2012. Borena B, Martens A, Broeckx S, Meyer E, Chiers K, Duchateau LD, et al. Regenerative Skin Wound Healing in Mammals: State-of-the-Art on Growth Factor and Stem Cell Based Treatments. Cell Physiol Biochem. 2015. Pastar I, Stojadinovic O, Yin N, Ramirez H, Nusbaum A, Sawaya A, et al. 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(I) Aspectos Estructurales y Funcionales de las Plaquetas. Diagn Biol. 2001; 50(3). Bueno J. PRoPosit. [Online] Acceso 06 de Octubrede 2022. Disponible en: https://proposit.es/elementos-que-influyen-en-la-obtencion-de-un-plasma-rico-en-plaquetas-prp-de-calidad/. Sáez B, Calvo B, Gayá P. Calidad del Plasma Rico en Plaquetas: Estudio de la Activación Plaquetaria. Esp Cir Oral y Maxilofac. 2007; 29(4). Pérez G, Medina A, Hernández H, al e. Plasma rico en plaquetas: estudio comparativo de cuatro protocolos para su obtención. Rev Cent Dermatol Pascua. 2017; 26(2). Sánchez M, Azofra J, Aizpurúa B, Elorriaga R, Anitua E, Andía I. Aplicación de Plasma Autólogo Rico en Factores de Crecimiento en Cirugía artroscópica. Cuader. Artroscopia. 2003; 10(19). González JC, López C, Carmona JU. Evaluación de un Método Manual para Producir Plasma Rico en Plaquetas Puro (P-PRP) en Conejos: Estudio Hematológico. Arch Med Vet. 2013. Weibrich G, Kleis WKG, Hitzler WE, Hafner G. Comparison of the Platelet Concentrate Collection System with the Plasma-Rich-In-Growth-Factors Kit to Produce Platelet-Rich Plasma: a Technincal Report.. INT J ORAL MAX IMPL. 2005; 20(1). Marques FP, McNeill SJ, Forgas , Da Silveira C, Sasaki H, Abdalla RJ. A Manual Method to Obtain Platelet Rich Plasma. Acta Ortop Bras. 2014; 22(2). Giraldo CE, López C, Carmona JU. Efectos de dos Anticoagulantes Sobre el Recuento Celular y Parámetros de Activación Plaquetaria de Plasma Rico en Plaquetas de Equinos. Arch. med. vet. 2015; 47(3). Lee EB, Won J, Seo P. Comparison of the Methods for Platelet Rich Plasma Preparation in Horses. J. Anim. Sci. Technol. 2018. Miranda S, Mello Costa MF, Reboucas , Ramos T, Lessa DAB, Alencar NX. Protocols for Preparation of Platelet Rich Plasma (PRP) in Quarter Horses. Pesq. Vet. Bras. 2019; 39(8). L. Marques AP, Botteon C, Cordeiro D, Machado CH, L. Botteon PT, de Barros. et al JPN. Padronização de Técnica Manual para Obtenção de Plasma Rico em Plaquetas de Bovino. Pesq. Vet. Bras. 2014; 34(1). Landis JR, Koch GG. The Measurement of Observer Agreement for Categorical Data. Biometrics. 1977; 33. Gemignani F, Perazzi A, Iacopetti. Use of canine sourced platelet-rich plasma in a feline contaminated cutaneous wound. CVJ. 2017; 58. Lacopetti L, Melotti L, Patruno Mea. Autologous Platelet -Rich Plasma Enhances the Healing of Large Cutaneous Wounds in Dogs. Fvets. 2020.
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Actualmente, existe diversidad de protocolos encontrados en la literatura para la obtención de PRP, por los cuales presentan requisitos adecuados a las condiciones del laboratorio donde son confeccionados, razón por la cual la reproducción de estos protocolos, puede resultar no ser completamente precisa al momento de realizarse para nuevos estudios en condiciones diferentes, además del hecho de omitir u obviar detalles que pueden ser necesarios para reproducir el procedimiento (instrumentos / materiales empleados o en el procesamiento de muestras); considerando también que en su mayoría, estos artículos no se encuentran validados, generando posibles sesgos en los resultados obtenidos. Por esta razón se considera necesario implementar medidas protocolarias adheridas a la norma vigente para poder garantizar la validez de los procedimientos realizados en el laboratorio. En respuesta a esta problemática, en el presente trabajo se realizó una revisión y practica de diferentes protocolos para la obtención de PRP, considerando el POES para procedimiento de trabajo y protocolo de validación. Se concluye que el protocolo idóneo para su validación consiste en uno de centrifugación compuesta (280g’ 7 min/ 720g’ 5 min); cuyo material biológico (sangre) fue obtenida de un canino sano con peso de 15 kg. Se determinó que el método para la obtención del PRP cumple con una concentración ideal capaz de generar respuesta en la regeneración de tejidos.In recent years, alternatives have been sought, such as autologous platelet concentrates capable of generating favorable responses in tissues. Currently, there is a diversity of protocols found in the literature for obtaining PRP, which have adequate requirements for the conditions of the laboratory where they are made, which is why the reproduction of these protocols may not be completely accurate when carried out for new studies under different conditions, in addition to the fact that they omit or obviate details that may be necessary to reproduce the procedure (instruments/materials used or in sample processing); in addition, most of these articles are not validated, generating possible biases in the results. obtained. For this reason, it is considered necessary to implement protocol measures adhered to the current standard in order to guarantee the validity of the procedures carried out in the laboratory. In response to this problem, in the present work a review and practice of different protocols for obtaining PRP was carried out, considering the POES for the work procedure and validation protocol. It is concluded that the ideal protocol for its validation consists of one of compound centrifugation (280g' 7 min/ 720g' 5 min); whose biological material (blood) was obtained from a healthy canine weighing 15 kg. It was determined that the method for obtaining PRP meets an ideal concentration capable of generating a response in tissue regeneration.Glosario. -- Resumen. -- Introducción. -- Justificación. -- Objetivos. -- Objetivo General. -- Objetivos específicos. -- Normatividad de laboratorio de ensayo. -- Validación de métodos. -- Requisitos del proceso. -- Selección, verificación y validación de métodos. -- Manipulación de muestra y aseguramiento de la validez de resultados. -- Conservar por medio de registro los datos del muestreo. -- Evaluación de la incertidumbre de medición. -- Aseguramiento de la validez de resultados. -- Marco Conceptual. -- Las plaquetas. -- Mecanismo fisiológico de cicatrización de heridas. -- Fases en el proceso de cicatrización. -- Hemostasia. -- Inflamación. -- Proliferación y reparación. -- Remodelación o maduración tisular. -- Células involucradas en la regeneración tisular. -- Factores de crecimientos en PRP. -- Fisiología de la activación plaquetaria. -- Observación de plaquetas en el microscopio óptico. -- Morfología e integridad de plaquetas. -- Presencia de pseudópodos. -- Agregación plaquetaria. -- Activación plaquetaria. -- Materiales y métodos. -- Ubicación geográfica. -- Población. -- Muestra. -- Tipo de muestreo. -- Elección del método. -- Equipos e instrumentos. -- Resultados. -- Primera fase -- Comparación de resultados obtenidos de los protocolos de única y doble centrifugación expuesto por los autores vs resultados obtenidos en el laboratorio clínico de la UCC. -- Segunda fase. -- Resultados cuantitativos: resultado del hemograma EDTA. -- Resultados de repetitividad sanguínea de los 13 tubos con citrato de sodio al 3,2 % en el analizador hematológico. -- Resultados del PRP. -- Resultado cualitativo: Resultados del PRP según el análisis del microscopio. -- Análisis estadístico. -- Discusión. -- Conclusion. -- Referencias Bibliográficas. -- Anexos.kareen.salazar@campusucc.edu.co143 p.Universidad Cooperativa de Colombia, Facultad de Ciencias de la Salud, Medicina Veterinaría y Zootecnia, BucaramangaMedicina veterinaria y zootecniaBucaramangaPRPCentrifugaciónValidaciónTG 2023 MVZ 52149PRPCentrifugationValidationApoyo en la validación de un protocolo aplicado para la obtención de plasma rico en plaquetas para su uso en la regeneración tisular en caninos realizado en el laboratorio clínico de la UCCTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionAtribución – No comercial – Sin Derivarinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Jiménez Canizales CE, Montoya Cañon M, Sepúlveda Arias JC. Uso de Plasma Rico en Plaquetas en la Práctica Clínica. RMR. 2014; 20(2).Castro S, Arias K. Actualización en Plasma Rico en Plaquetas. Acta méd costarric. 2019; 61(4).Rodríguez J, Palomar A, Torres J. Plasma Rico en Plaquetas: Fundamentos Biológicos y Aplicaciones en Cirugía Maxilofacial y Estética Facial. RECOM. 2012; 34.Comar S, Danchura H, Silva PH. Contagem de plaquetas: avaliação de metodologias manuais e aplicação na rotina laboratorial. Bras. Hematol. Hemoter. 2006.Lorente A. Estudio de Microscopía Electrónica y Cuantificación de los Factores de Crecimiento Mediante un Nuevo Procedimiento de Obtención de Plasma Rico en Plaquetas [Tesis] , editor. [Madrid]: Universidad Complutense de Madrid; 2010.ISO. INTE/ISO/IEC 17025:2017. Requisitos Generales Para la Competencia de los Laboratorios de Ensayo y Calibración. Segunda ed.; 2017.ICA. Resolución No.093858; 2021.Gómez B, Rodríguez F, Díaz E. Fisiologìa Plaquetaria, Agregometría Plaquetaria y su Utilidad Clìnica. Med Int Méx. 2018; 34(2).Vizcaino G. Fisiología Plaquetaria. Avances en la Reactividad Plaquetaria. Revisión. Invest Clin. 1994; 35(1).Chicharro D, Rubio M, Damiá E, Carrillo JM, Cuervo B, Peláez P, et al. Platelet Rich Plasma: New Insights for Cutaneous Wound Healing Management. J. Funct. Biomater. 2018; 9(10).De la Fuente G. Fisiopatologìa de la inflamaciòn. 2004.Singer A, Clark R. Cutaneous Wound Healing. The New England Journal of Medicine. 1999; 341(10).Maxson , Lopez E, Yoo D, Miagkova A, Leroux M. Concise Review: Role of Mesenchymal Stem Cells in Wound Repair. Stem Cells Transl. Med. 2012.Borena B, Martens A, Broeckx S, Meyer E, Chiers K, Duchateau LD, et al. Regenerative Skin Wound Healing in Mammals: State-of-the-Art on Growth Factor and Stem Cell Based Treatments. Cell Physiol Biochem. 2015.Pastar I, Stojadinovic O, Yin N, Ramirez H, Nusbaum A, Sawaya A, et al. Epithelialization in Wound Healing: A Comprehensive Review. Adv. Wound Caref. 2014; 3(7).Valsecia M. Farmacologìa de la Coagulaciòn Sanguìnea. Anticoagulantes, Antitrombòtico y agentes Trombolìticos.Camps F. Eficacia de la infiltración de Plasma Rico en Plaquetas (PRP) en pacientes diagnosticados del Síndrome de la Fascia Plantar (SFP) desde el punto de vista clínico y funcional [Tesis] , editor. [Madrid]: Universidad Complutense de Madrid ; 2016.PolyMem. [Online]; 2021. Disponible en: https://www.polymem.es/el-papel-de-la-inflamacion-en-las-heridas-y-como-contrarrestarla/.Baum C, Arpey. Normal Cutaneous Wound Healing: Clinical Correlation With Cellular and Molecular Events. Dermatol. Surg. Marzo; 31.Colágenos: Tipos, Composición, Características y Distribución en Tejidos. Elsevier sci. 2019.Romero A. Cicatrización. RMS. 2016; 1(9).Barañano. Uso del plasma rico en factores de crecimiento (PRGF Endoret) en úlceras por presión en personas institucionalizadas en Centros Socio Sanitarios. Un Ensayo Clínico Controlado y Aleatorizado [Tesis] , editor.: Universidad de Cantabria ; 2017.Fontoura R. AVALIAÇÃO DE SETE PROTOCOLOS DE OBTENÇÃO DE PLASMA RICO EM PLAQUETAS (PRP) [Tesis] , editor. [Santa Maria]: UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA; 2012.Lacci K DA. Platelet-Rich Plasma: Support for Its Use in Wound Healing. Yale J Biol Med. 2010; 83.Cruz A. Biología de la Cicatrización. Rev Asoc Colomb Dermatol. 2003; 11(1).Rivera J, Lozano , Corral , González C, Martínez C. Platelet GP Ib/IX/V complex Physiological role. J. Physiol. Biochem. 2000; 56(4).Sharathkumar AA, Shapiro AD. Trastornos de la Función plaquetaria. 2008;(19).Ruiz E. Antiagregantes plaquetarios. Rev.peru.cardiol. 2006.Monteiro MC, Connor JE, Martínez M. La Citometría de Flujo en el Análisis de las Plaquetas. (I) Aspectos Estructurales y Funcionales de las Plaquetas. Diagn Biol. 2001; 50(3).Bueno J. PRoPosit. [Online] Acceso 06 de Octubrede 2022. 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Apoyo en la validación de un protocolo aplicado para la obtención de plasma rico en plaquetas para su uso en la regeneración tisular en caninos realizado en el laboratorio clínico de la UCC

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