Efecto de la atresia folicular temprana sobre la competencia de los oocitos bovinos y la cantidad de embriones producidos in vitro (Resultados Preliminares).
Este estudio pretende evaluar el efecto de la atresia folicular temprana sobre la tasa de blastocistos producidos in vitro y la expresión de los genes OCT-4 y MATER en el oocito y de FST en células del cúmulo. Los ovarios son aspirados a las 0 h y a las 4 h después del faenado, las células del cúmul...
- Autores:
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Urrego Álvarez, Rodrigo
Baena Valencia, María Camila
Borrero Ángel, Laura
Villada Sierra, Clara María
Hoyos Solís, Verónica
Saldarriaga Valencia, Luisa Fernanda
Muñoz Sánchez, Laura
- Tipo de recurso:
- Fecha de publicación:
- 2011
- Institución:
- Universidad CES
- Repositorio:
- Repositorio Digital - Universidad CES
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.ces.edu.co:10946/1032
- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10946/1032
- Palabra clave:
- Fertilización in vitro
Ganado bovino
Reproducción in vitro
Fuentes de energía
Medicina veterinaria y zootecnia
Producción bovina
- Rights
- openAccess
- License
- Open access
| Summary: | Este estudio pretende evaluar el efecto de la atresia folicular temprana sobre la tasa de blastocistos producidos in vitro y la expresión de los genes OCT-4 y MATER en el oocito y de FST en células del cúmulo. Los ovarios son aspirados a las 0 h y a las 4 h después del faenado, las células del cúmulo son separadas en medio TL-Hepes con 2.5% de tripsina precalentada a 39 ° C y 5 min de vortex. Se ha determinado que un total de 80 oocitos son suficientes para obtener una adecuada cantidad de RNA (1.000- 3.000 ng/μl) extraído por el método Trizol®. El RNA total es pasado a cDNA y la estandarización de la qPCR se realizó con las siguientes secuencias de primers: OCT-4 (NM_174580.2) F 5´AGTGAGAGGCAACCTGAAGA3´ R 5´ ACACTCGGACCA CGTCTTTC3´, MATER (NM_001007814.2) F 5´GAAGTGTGGCTGCAGTTGA A3´ y R 5´ATGCCTCAGCAAATTCATCC 3´, FST (NM_175801.2) F 5´AAAACCTACCGCAACGAATG3´ y R 5´GAGCTGCCTGGACAGAAAAC3´, gen normalizador GAPDH F 5´TGCTGGTGCTGAGTATGTGGT3´ y R 5´AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT3´. La cuantificación se está realizando con el kit QuantiTect® SYBR® Green PCR y las condiciones de la qPCR son 95 ° C 15 min para una desnaturalización inicial y 40 ciclos de 95 ° C por 15 s, 60 °C por 20 s, 72° C por 20 s y una extensión final de 72 ° C por 5 min. Se realizarán tres repeticiones por cada grupo para analizar la expresión génica y las tasas de desarrollo embrionario. Los resultados se analizarán por ANOVA utilizando SAS 9.1.3 y la expresión génica relativa se calculará usando el software REST. |
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